Заражение селезенки

На 21-й день после заражения селезенки извлекали, взвешивали и готовили из них гомогенат на среде Игла с 10 %-ной бычьей сывороткой. В гомогенат вносили актиномицин Д в концентрации 0,05 мкг/мл (для подавления синтеза РНК) и через 30 мин инкубации при 37 °С в систему вводили Гридин (СССР, 29 Ки/ммоль, 10 мкКи/мл) и инкубировали 30 мин при той же температуре. После инкубации клетки дважды отмывали буфером тритон Б) и выделяли гетерогенную ядерную методом фенольной термической экстракции при 65°С Электрофорез проводили по ранее описанному методу. После электрофореза гели окрашивали, обесцвечивали, депситометрировали и разрезали на отрезки длиной 2 мм. Отрезки инкубировали в 0,2 мл 40 %-ной перекиси водорода в течение 12 ч. при 56°С, заливали сцинтилляторной жидкостью (ЖС-8) и просчитывали радиоактивность каждого отрезка на сцинтилляционном счетчике (SL-30).

Читайте также:  Последовательность морфогенетических процессов

На приведена сенситограмма богатого лизином гистона Н5, полученного предложенным нами способом. Сенситограмма свидетельствует о высокой степени гомогенности препарата. При введении гистона Н5 животным, инфицированным вирусом Раушера, обнаружено угнетение развития лейкоза, что проявляется в уменьшении средней массы селезенки у подопытных животных по сравнению с контролем. Для выяснения механизма ингибирующего действия гистона Н5 на развитие лейкоза Раушера мы исследовали его влияние на синтез РНК клеток селезенок мышей, инфицированных вирусом

Раушера. Ранее нами было установлено, что в клетках селезенок мышей с лейкозом Раушера синтезируется компонент ядерной РНК с коэффициентом седиментации 35S, отсутствующий в клетках селезенок здоровых мышей. Исследование свойств 35S РНК дало возможность заключить, что эта РНК, хотя и содержит в своем составе специфические последовательности, но в основном комплементарная клеточному геному. Есть основания предполагать, что 35S о РНК синтезируется в клетках под влиянием лейкемогенного вируса. Поэтому 35S РНК мы использовали в качестве маркерного признака лейкозных клеток в опытах по изучению влияния гистона Н5 на синтез РНК.